Микробиологическая диагностика
Бактериоскопический метод диагностики бруцеллеза в медицинской практике не получил распространения.
Бактериологический метод диагностики бруцеллеза заключается в получении гемо-, урино-, миелокультур и др.
Гемокультуры. Бруцеллы из крови выделяются уже в первые дни болезни до 85% на высоте лихорадки, реже при субфебрильной температуре, а иногда даже при нормальной в отдаленные сроки от начала заболевания. Положительные гемокультуры удаются реже в пределах 13—50%. Метод выделения: кровь, взятую из локтевой вены, засевают на цитратный (0,2%) мясо-пептонный или печеночный бульон (60—100 мл) по 4—5 мл в колбу. Посевы помещают в термостат при 37°; одна из колб помещается в условия с повышенным содержанием С02. Через каждые 3—4 дня из колб делают высевы на скошенный агар до получения культуры. При стерильных высевах наблюдения ведутся в течение месяца. Наилучший эффект дает метод засева крови в желток свежего жирового яйца или желточный мешок куриного эмбриона. В каждое яйцо вводится стерильно шприцем по 0,1—0,2 мл крови, разведенной 1 : 3 нитратным бульоном. Инфицированные яйца помещаются на 5 дней в термостат, а затем содержимое их по 0,3—0,5 мл засевают на твердые и жидкие питательные среды. Посевы просматривают каждые 2—3 дня.
Миелокультуры при бруцеллезе получают почти в 2 раза чаще, чем гемокультуры, не только в ранние, но и поздние сроки болезни. Пунктат костного мозга, полученного шприцем из грудины больного, засевают на твердые и жидкие среды.
Уринокультуры выделяют как при остром, так и хроническом бруцеллезе, преимущественно на протяжении первого года болезни (процент выделения от 4,3 до 16,3). Для исследования мочу собирают катетером, центрифугируют и осадок засевают (0,1 мл) на агар с генцианвиолетом (разведение 1:200 000) в чашках Петри.
Копрокультуры выделяют редко. При исследовании к суспензии испражнений прибавляют агглютинирующую сыворотку и оставляют на 2 часа в термостате, затем центрифугируют. Осадок растворяют в физиологическом растворе и засевают на агар с генцианвиолетом.
Лактокультуры при исследовании коровьего и женского молока выделяют путем засева на агар с генцианвиолетом сливок, полученных центрифугированием или отстаиванием.
Выделение бруцелл из бактериально загрязненных материалов (молоко, моча, желчь, испражнения, мокрота, гной и др.) хорошо удается на куриных яйцах (Анина-Радченко). Исследуемые материалы центрифугируют, осадок разводят раствором генцианвиолета (1 : 200 000) 1 : 3—1 : 5 и засевают на 3—5 яиц по 0,2 мл в каждое; дальнейшее наблюдение ведется так же, как и при посевах крови. При биологическом методе выделения бруцелл исследуемый материал вводят подкожно в объеме 0,5 до 3 мл здоровым морским свинкам или белым мышам. Через месяц свинок исследуют серологически, по аллергической пробе и бактериологически; мышей исследуют бактериологически через 3 недели.
Серологическая диагностика бруцеллеза. Широко используется реакция агглютинации (Райта), предложенная в 1897 г. Она высоко специфична, обнаруживается в самом начале болезни и может сохраняться по исчезновении клинических симптомов болезни. Методика: сыворотку исследуемой крови разводят физиологическим раствором (1 : 25, 1 : 50 и до 1 : 1600). В каждую пробирку с 0,5 мл разведенной сыворотки добавляют 0,5 мл стандартного антигена, разведенного до содержания 1 млрд. бактерий в 1 мл. В качестве антигена используют взвесь бруцелл, убитых формалином. Пробирки помещают на 4 часа в термостат и затем оставляют при комнатной температуре до следующего дня. Результаты учитывают по четырехбалльной оценке (крестами) в зависимости от степени осаждения агглютината и просветления жидкости. Наблюдаются случаи неспецифической реакции при сыпном тифе и туляремии. Диагностическое значение при реакции Райта имеет агглютинация, наступающая при разведении сывороток не ниже 1 : 100. Широкое применение в эпидемиологической практике получил ускоренный метод серодиагностики бруцеллеза с помощью агглютинации на стекле (Хеддльсон, 1926).
Чувствительность метода обусловлена применением неразведенной сыворотки и концентрированного антигена. В СССР методика реакции Хеддльсона несколько упрощена для полевых условий: на обычное стекло, разграфленное на квадраты, наносят пипеткой сыворотку в количествах: 0,08; 0,04; 0,02 и 0,01; к сыворотке добавляют по одной капле антигена Хеддльсона (микробная взвесь с генцианвиолетом 1 : 50 000 и бриллиантгрюном 1 : 25 000), сыворотку смешивают с антигеном, и затем стекло подогревают (37°) над пламенем горелки, над плиткой или электролампой. При положительной реакции в первые минуты появляются ясные хлопья. Реакция связывания комплемента при бруцеллезе более постоянна и достоверна, чем реакция Райта. Положительная реакция появляется у больных к 20—25 дню и длительно сохраняется. Реакции преципитации и флокуляции не нашли применения в диагностике бруцеллеза.