Микробиологическая диагностика брюшного тифа основывается на выделении возбудителя из организма и обнаружении специфических антител. Для выделения возбудителя в начальном периоде болезни исследуются кровь и в некоторых случаях дуоденальное содержимое, костный мозг, содержимое розеол и др. материалы; в поздние сроки, кроме того,— испражнения, моча, спинномозговая жидкость, гной. В случае смерти исследуется секционный материал. Посев мокроты, пота, гноя, спинномозговой, плевральной и др. жидкостей применяется для выяснения природы осложнений.
Посев крови. Результаты исследования крови зависят от периода и тяжести болезни, количества взятой крови, качества питательной среды. Наиболее часто (до 100%) гемокультура брюшного тифа выделяется на 1-й неделе болезни, на 2—3-й неделе процент положительных находок снижается. Для повышения эффективности исследования некоторые авторы рекомендуют за 15 мин. до взятия крона «водить подкожно 1 мл адреналина в разведении 1:1000, под влиянием его, по мнению ряда авторов, возбудитель, находящийся в селезенке, поступает в кровь. Кровь для посева в течение первой недели болезни с соблюдением стерильности берется из локтевой вены в количестве не менее 10 мл. В более поздние сроки и во время рецидивов целесообразен посев крови в количестве 15—20 мл. У детей кровь в небольшом количестве берут из пятки, пальца, мочки уха. Кровь засевается в жидкую питательную среду в соотношении не менее чем 1: 10.
Из жидких питательных сред применяются: Рамотортл среда по 100, 150, 200 мл во флаконе: 10% желчный бульон по 100, 150, 200 мл во флаконе; бычья желчь по 5—10 мл в пробирке; мясопептонный бульон с 1% глюкозы во флаконах по 100, 150, 200 мл; стерильная дистиллированная или водопроводная вода в тех же объемах. Питательным субстратом в последнем случае служат продукты распада форменных элементов крови. Наилучшие результаты получаются при использовании первых двух сред. При невозможности посеять кровь у постели больного для предупреждения свертывания 10 мл крови выливают в пробирку с 2 л.« 5% стерильного раствора лимоннокислого натрия. В лаборатории нитратная кровь засевается в одну из вышеуказанных сред. Для уменьшения бактерицидных свойств крови при невозможности провести посев на месте некоторые авторы рекомендуют производить посев кровяного сгустка. Кровь из шприца выливается в стерильную пробирку. Образовавшийся сгусток после удаления стерильной пипеткой сыворотки размельчают стерильной стеклянной палочкой и засевают на одну из перечисленных сред. Посев крови помещается в термостат при 37° на 18—24 часа. В положительных случаях через этот срок (иногда позже) на средах с желчью отмечается помутнение среды или небольшой придонный осадок; среда Рапопорта при росте брюшнотифозных палочек мутнеет и краснеет (образование кислоты вследствие разложения глюкозы или маннита). Из флакона производят высев на чашку с твердой дифференциальной средой с лактозой (Эндо, Левина и др.). Высев на среду Плоскирева (бактоагар Ж) проводить не рекомендуется, поскольку из-за резкой смены условий питания брюшнотифозная палочка не растет или растет очень плохо. Одновременно готовят и изучают мазки, окрашенные по Граму, подвижность в висячей или раздавленной капле. В случаях роста чистой культуры производят посев на косой агар и среды Гисса. Все посевы ставят в термостат при 1°37° до следующего дня. При обнаружении чистой культуры подвижных, грамотрицательных палочек, покраснения среды Рапопорта без газообразования дается предварительное положительное заключение о выделении возбудителя брюшного тифа.
На второй день исследования изучают колонии на дифференциальной среде и прозрачные, бесцветные или цвета среды колонии пересевают на «короткий пестрый ряд» (жидкие или полужидкие среды с лактозой, глюкозой и косой агар) или на Ресселя среду для дальнейшего изучения. Использование полужидких сред Гисса позволяет определить подвижность микробов (на лактозе), не прибегая к высеву на среду Пешкова. Полученную на косом агаре чистую культуру исследуют в окрашенных по Граму мазках и определяют подвижность микроба. По обнаружении грамотрицательных, подвижных палочек производят посев: на «длинный пестрый ряд» (среды Гисса с лактозой, глюкозой, маннитом, мальтозой, сахарозой); на косой агар, на мясопептонный бульон с вложенными под пробку полосками фильтровальной бумаги, смоченными насыщенным раствором уксусно-кислого свинца (для определения сероводорода) и 12% раствором щавелевой кислоты (для определения индола). Одновременно на предметном стекле ставят ориентировочную реакцию агглютинации и при положительном результате для определения титра развернутую агглютинацию с соответствующими специфическими сыворотками.
Если после первого высева на дифференциальной среде рост отсутствует, то последующие высевы производят ежедневно в течение 7 суток. При отсутствии роста на 8 сутки дается отрицательный ответ. При слабо выраженной бактериемии рост возбудителя в ряде случаев обнаруживается на 2— 3 неделе выдерживания посевов в термостате. В сомнительных случаях поэтому рекомендуется делать высевы до 24-го дня с момента взятия материала, независимо от получения отрицательного результата на 8-е сутки исследования.